Biología Celular y Molecular de la Reproducción

El espermatozoide de mamífero sufre una serie de cambios bioquímicas denominados capacitación y exocitosis acrosomal en su transito por el tracto reproductor femenino, los cuales le permiten adquirir su capacidad fecundante. El objetivo de nuestro laboratorio es comprender los mecanismos celulares y moleculares responsables de regular la capacitation y la reaccion acrosomal del espermatozoide de mamífero.

 

Biología Celular y Molecular de la Reproducción

  • Director

    Dr. Mariano G. Buffone Currículum Vitae

    Investigador Adjunto (CONICET)

  • Integrantes

    Dra. Alejandra Vitale (Investigadora CONICET)

    Dra Guillermina Maria Luque (Becaria post Doctoral CONICET)

    Lic. Ana Romarowski (Becaria tipo I CONICET)

    Lic. Florenza La Spina (Becaria tipo I CONICET)

    Bioq. Lis Puga Molina (Becaria tipo I CONICET)

    Est. Belen Hugo

Línea de investigación

La habilidad del espermatozoide de mamífero de adquirir la capacidad fecundante durante su pasaje por el tracto reproductor femenino se denomina capacitación. Durante este proceso el espermatozoide adquiere la capacidad de sufrir la reacción acrosomal y la de penetrar la matriz extracelular que rodea al ovocito denominada zona pelucida. Durante la exocitosis acrosomal la membrana acrosomal externa y la membrana plasmática se fusionan en múltiples puntos, causando la liberación y dispersión del contenido acrosomal. La exocitosis es un tipo particular de secreción regulada que comparte varios mecanismos básicos descriptos para otras células secretorias como neuronas y células del sistema endocrino. Nuestro laboratorio estudia los mecanismos moleculares y celulares responsables de la adquisición de la capacidad de sufrir la reacción acrosomal durante la capacitation in espermatozoides de mamíferos, un evento fundamental permite la fertilización.

 

Principales líneas de investigación:

 

1. Estudiamos la participación de las pequeñas GTPasas de la superfamilia RHO en el camino de señalización que lleva a la polimerización de actina durante la capacitación del espermatozoide de ratón. El proceso de exocitosis en células somáticas y en espermatozoides de distintas especies es controlado por cambios en la dinámica de actina. Las pequeñas GTPasas son reguladores maestros de la dinámica de actina en células somáticas, sin embargo su función en espermatozoides de ratón no ha sido estudiada aun.

 

2. Mediante el uso de un modelo de ratón transgenico, el cual posee la proteína fluorescente GFP en el acrosoma y DsRed en el flagelo (Figura 1), monitoreamos el proceso de capacitación y reacción acrosomal in vivo en el oviducto de la hembra.

Por muchos años se acepto que la reacción acrosomal ocurría luego que el espermatozoide interactuara con la zona pelucida (ZP) del ovocito. Sin embargo esta observación se baso en experimentos in vitro usando ZP solubilizada o mediante tratamientos mas agresivos como el uso de ionoforos de calcio. Recientemente se ha publicado evidencia muy sólida que sugiere que la ZP no seria el sitio fisiológico donde ocurre la reacción acrosomal. Utilizando este mismo modelo de ratón transgenico  nuestro laboratorio también estudia la interacción entre el calcio y la exocitosis acrosomal mediante un sistema de imagen en tiempo real que permite monitorear ambos eventos simultáneamente.

 

3. La capacitación es un proceso complejo que involucra múltiples pasos que incluyen la reorganización de la membrana plasmática, la regulación de la permeabilidad a iones así como la salida de colesterol, entre otras cosas. El transporte de iones a través de la membrana y su asociación con la fosforilación de proteínas no ha sido muy estudiada en espermatozoides humanos. En este contexto nosotros estudiamos dos aspectos claves de este proceso:

 

a) El rol que tiene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator), un transportador de cloro y bicarbonato, en la capacitación de espermatozoides humanos y su participación en las redes de transducción de señales asociadas a este proceso. En particular estudiamos la regulación de dos características claves del proceso de capacitación, los cambios en los niveles de pH y los cambios en el potencial de membrana (hiperpolarización).

c) Los mecanismos moleculares asociados con la inhibición de la capacitación mantenida por factores presentes en el plasma seminal.

 

IMAGEN: Espermatozoides transgénicos para visualizar la exocitosis acrosomal y la migración de las gametas a través del oviducto.

Subsidios y Transferencia Tecnologica

Subsidios de Investigación y desarrollo y STAN

a) Subsidios de Investigación y desarrollo.

 Activos:

RO1TW008662. National Institute of Health (NIH). Fogarty International Center. USA. Titulo: Role of actin cytoskeleton during Mouse sperm acrosomal exocitosis. Periodo: 3/2012-3/2016.

PICT 2012-1175. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica Argentina. Titulo: Eventos moleculares y celulares asociados con la exocitosis acrosomal en espermatozoides de mamífero. Periodo: 10/2012-10/2015.

PIP 112-2011-010074. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas. Titulo: Estudios de proteínas y mecanismos moleculares involucrados en el desarrollo de la capacidad fecundante del espermatozoide de mamífero. Periodo: 2012-2014.

 

Finalizados

PICT 2010-2426. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica Argentina. Titulo: Mecanismos moleculares relacionados con la exocitosis acrosomal en espermatozoides de mamífero.. Periodo: 10/2011-10/2013.

 

b) Servicios Tecnológicos de Alto Nivel (STAN)

STAN ST653. Asesoría Científica en Biología de la Reproducción. Resolución numero 1423 de CONICET

Distinciones y premios obtenidos

Desde 2003 hasta la fecha

1.   Premio al trabajo científico “Caracterización del aumento de calcio intracelular en respuesta a la progesterona en espermatozoides de ratón”. Romarowski A; Sanchez-Cárdenas C; Darszon A; Buffone MG. XVI Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 2-4 de Diciembre de 2014.

2.   Premio al trabajo científico “La activación de las pequeñas GTPasas RHOA y RAC1 durante la capacitación espermática resulta en la fosforilación de LIMK/COFILIN, la cual es esencial para la polimerización de actina y la exocitosis acrosomal” Romarowski A, La Spina FA, Battistone MA, Cuasnicu P, Vitale AM, Visconti PE, Krapf D, Buffone MG. LIX Reunión científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y la Sociedad Argentina de Inmunología. Mar del Plata 19 al 22 de Noviembre de 2014

3.   Premio al mejor trabajo científico por “La proteína VCP (valosin containig protein) se localiza en el segmento ecuatorial del acrosoma espermático murino y es liberada durante la exocitosis acrosomal”. La Spina F; Romarowski A; Vitale A; Visconti P; Buffone M. XV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 4-6 de Diciembre de 2013.

4.   Royan International Award in Reproductive Biology. Septiembre de 2013.

5.   Young Andrologist Award. International Society of Andrology (ISA). Febrero de 2013.Premio Joven Andrólogo 2011. Sociedad Argentina de Andrología (SAA) y Federación Iberoamericana de Sociedades de Andrología (ANDRO). Abril de 2012.

6.   Visiting Professor Award. Japanese Society for Promotion of Science (JSPS). Octubre de 2011.

7.   Premio a la mejor presentación cientifica por “Functional Consequences of Cleavage, Disassociation and Exocytotic Release of ZP3R/sp56 From the Mouse Sperm Acrosomal Matrix”. 34th Annual Meeting of the American Society of Andrology. Philadelphia, PA. USA. 4 al 7 de Abril de 2009.

8.   Bayard T. Storey Award for Scientific Excellence. Annual Retreat of the Center for Research and Reproduction in Women’s Health. 7 de Mayo de 2008.

9.   Premio al mejor trabajo científico por “The expression of CCR6 Receptor in sperm is associated with sperm motility and chemotaxis”. XIII Congreso de la Sociedad Española de Andrología. (2007).

10.  Premio al mejor trabajo científico por “Relación entre la calidad funcional y la fosforilación proteica en residuos tirosina en subpoblaciones de espermatozoides humanos”, presentado en el IV Congreso Argentino de Andrología. Mar del Plata, 19 al 21 de Septiembre de 2003.

Presentaciones a reuniones científicas

Últimos 5 años
  1. Src is a connecting player between PKA activity and hyperpolarization during mouse sperm capacitation. Stiva C; La Spina FA; Arranz SA; Visconti PE; Buffone MG; Krapf D. XVI Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 2-4 de Diciembre de 2014.
  2. Los espermatozoides de ratón realizan la exocitosis acrosomal en istmus proximal del oviducto. La Spina, Romarowski A, Puga Molina L, Vitale AM, Hirohashi N, Buffone MG. XVI Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 2-4 de Diciembre de 2014.
  3. Caracterización del aumento de calcio intracelular en respuesta a la progesterona en espermatozoides de ratón. Romarowski A; Sanchez-Cárdenas C; Darszon A; Buffone MG. XVI Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 2-4 de Diciembre de 2014.
  4. Src is a connecting player between PKA activity and hyperpolarization during mouse sperm capacitation. Stiva C; La Spina FA; Arranz SA; Visconti PE; Buffone MG; Krapf D. Congreso de la Sociedad Arg. de Investigación Bioquímica y Biología Molecular. Rosario, Noviembre de 2014.
  5. El canal CFTR es esencial para la activación de la vía AMPc/PKA asociada a la capacitación y participa en la regulación del pH intracelular en espermatozoides humanos. Puga Molina LC, Romarowski A, La Spina FA, Vitale AM, Buffone MG. LIX Reunión científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y la Sociedad Argentina de Inmunología. Mar Del Plata 19 al 22 de Noviembre de 2014.
  6. Redistribución de la proteína EGFP en el acrosoma como indicador previo a la exocitosis acrosomal en espermatozoides murinos. La Spina FA, Romarowski A, Puga Molina LC, Vitale AM, Hirohashi N, Buffone MG. LIX Reunión científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y la Sociedad Argentina de Inmunología. Mar Del Plata 19 al 22 de Noviembre de 2014.
  7. La activación de las pequeñas GTPasas RHOA y RAC1 durante la capacitación espermática resulta en la fosforilación de LIMK/COFILIN, la cual es esencial para la polimerización de actina y la exocitosis acrosomal. Romarowski A, La Spina FA, Battistone MA, Cuasnicu P, Vitale AM, Visconti PE, Krapf D, Buffone MG. LIX Reunión científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y la Sociedad Argentina de Inmunología. Mar del Plata 19 al 22 de Noviembre de 2014.
  8. Study of pH changes during human sperm capacitation. Torres- Rodríguez P, Buffone MG, Puga Molina L, Darszon A, Treviño CL. Sociedad Mexicana de Bioquimica. 2-8 Noviembre de 2014. Guadalajara, Mexico.
  9. Activation of the small GTPases RhoA/C and Rac1 during mouse sperm capacitation results in phosphorylation of LIMK/COFILIN and is essential for acrosomal exocytosis. Romarowski A, La Spina FA, Battistone MA, Cuasnicu PS, Visconti PE, Buffone MG. 47th Annual Meeting, Society for the Study of Reproduction. Grand Rapids, MI, USA. 19-23 Julio de 2014
  10. Nuevos conceptos sobre la exocitosis acrosomal. Aspectos moleculares y celulares. Buffone M. Jornada satélite de SAIC “Ovocitos y espermatozoides: nuevas miradas en el estudio de la fecundación”. 18 y 19 de Diciembre de 2013.
  11. La proteína VCP (valosin containig protein) se localiza en el segmento ecuatorial del acrosoma espermático murino y es liberada durante la exocitosis acrosomal. La Spina F; Romarowski A; Visconti P; Buffone M. XV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 4-6 de Diciembre de 2013.
  12. LIMK1/2 participa en los mecanismos asociados a la motilidad espermática por una vía independiente de la polimerización de actina. Romarowski A, La Spina FA, Battistone MA, Cuasnicu PS, Buffone MG. XV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología. Chascomus, 4-6 de Diciembre de 2013.
  13. La proteína VCP (valosin containig protein) se localiza en el segmento ecuatorial del acrosoma espermático murino y es liberada durante la exocitosis acrosomal. La Spina F; Romarowski A; Visconti P; Buffone M. LVIII reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. Mar del Plata, 20-23 de noviembre de 2013.
  14. Participación de las pequeñas GTPasas en la polimerización de actina espermática durante la capacitación y la exocitosis acrosomal. Romarowski A; Przepiora E; Battistone M; La Spina F.; Cuasnicu P; Visconti P; Buffone M. LVIII reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. Mar del Plata, 20-23 de noviembre de 2013.
  15. Caracterización básica de entidad proteica que revierte la capacitación en el plasma seminal humano. Puga Molina L; Verstraeten S; Buffone M. LVIII reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. Mar del Plata, 20-23 de noviembre de 2013.
  16. La activación β-adrenérgica induce cambios en el citoesqueleto de células no tumorales. de mama humana MCF-10. Gargiulo L; Rivero E; Romarowski A; Buffone M; Luthy I; Bruzzone A. LVIII reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. Mar del Plata, 20-23 de noviembre de 2013.
  17. Role of actin cytoskeleton during mouse sperm acrosomal exocytosis. Buffone MG. Royan International Twin Congress on Reproductive Biomedicine and Stem Cells Biology & Technology. Tehran, Iran. 2-4 de Septiembre de 2013.
  18. Relocalization of EGFP as a marker to detect pre-exocitic stages of mouse sperm acrosomal exocytosis. Buffone MG. Frontiers in Reproduction Symposium. Woodshole, MA. USA. Junio de 2013.
  19. Disertación en el International Congress of Andrology ICA2013. International Society of Andrology. New Concepts about mouse sperm acrosomal exocytosis. Melbourne, Australia. 24-27 de Febrero de 2013.
  20. Simposio en Univ. de Pennsylvania in Celebration of the 80th Birthday of Bayard T. Storey. “Getting help with my acrosome story from Dr. Storey”. Philadelphia, USA. Agosto de 2012.
  21. Caracterización Bioquímica de modificaciones en histonas asociadas a cambios epigenéticos en células germinales y espermatozoides. La Spina F, Romanato M, Brugo Olmedo, S, De Vincentiis S, Calvo JC, Buffone MG. VI Congreso de la Sociedad Argentina de Andrología y de la Federación Iberoamericana de Sociedades de Andrología (ANDRO). Buenos Aires, Argentina. 18-21 de Abril de 2012.
  22. La superoxido dismutasa espermática es un buen predictor de la recuperación de la movilidad espermática humana luego de la criopreservación. Buffone MG, Calamera JC, Brugo-Olmedo S, De Vincentis S, Calamera MM, Storey BT, Doncel GF, Alvarez JA. VI Congreso de la Sociedad Argentina de Andrología y de la Federación Iberoamericana de Sociedades de Andrología (ANDRO). Buenos Aires, Argentina. 18-21 de Abril de 2012.
  23. Role of actin cytoskeleton during mouse sperm acrosomal exocytosis. Buffone MG, Romarowski A, La Spina F. The 4th Meeting of Allogeneic Authentication in Animals and Plants. University of Tsukuba, Tsukuba, Japan. 10 al 12 de Enero de 2012.
  24. Disertación en Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Andrología “Bases fisiológicas y moleculares de la fragmentación en el ADN”. Rosario, Santa Fe. 2 de Noviembre de 2012.
  25. Disertación en la Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Andrología La superoxido dismutasa espermática es un buen predictor de la recuperación de la movilidad espermática humana luego de la criopreservación. Buenos Aires, 30 de Noviembre de 2012.
  26. Disertación en la XXXI Reunión Científica de la Soc. de Biología de Rosario. Nuevos conceptos sobre la exocitosis acrosomal en el modelo de ratón. Rosario, 1 de Diciembre de 2011.
  27. Disertación en el Primer Simposio SEREMAS sobre Genética Reproductiva. Buenos Aires, Argentina, Septiembre de 2011.
  28. Disertación en la XXXI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Andrología. "Nuevas estrategias diagnósticas en Andrología: de la Epigenética al proceso de fertilización". Buenos Aires, 25 de Noviembre de 2011.
  29. Proteomic of the guinea pig sperm acrosomal contents and membranes. Arnone V, Johnson A, Buffone MG, Gerton GL, Foster J. 18th Gordon Research Conference on Fertilization and the Activation of Development. Holderness School, Plymouth, NH, USA. Julio de 2011.
  30. Real time observation of the acrosomal status of living spermatozoa approaching ZP of cumulus-oocyte complex Buffone MG, Romarowski A, La Spina F. Frontiers in Reproduction Symposium. Woodshole, MA. USA. Junio de 2011.
  31. Avances diagnósticos y terapéuticos en andrología. Buffone MG. XI Congreso Nacional de Química Clínica y Medicina del Laboratorio. Federación Mexicana de Colegios de Química Clínica. León, México. 5 al 8 de Mayo de 2011.

Colaboraciones

Universidad Nacional Autonoma de Mexico (UNAM)

Dr Alberto Darzon: Instituto de Biotecnología.

Dra. Claudia Treviño: Departamento de Genética del Desarrollo y Fisiología Molecular.

University of Massachusetts Amherst

Dr. Pablo Visconti: Department of Veterinary and Animal Sciences

 

Shimane Univestiy, Japón

Dr. Noritaka Hirohashi: Oki Marine Biological Station 

Publicaciones

En revistas internacionales
  1. La Spina FA, Puga Molina L, Romarowski A, Vitale AM, Krapf D, Hirohashi N, Buffone MG. Mouse sperm begin to undergo acrosomal exocytosis in the upper isthmus of the oviduct. Dev. Biol. (2016). (en prensa).
  2. Romarowski A; Sanchez Cardenas C; Ramirez Gomez HV; Puga Molina LC; Hernandez Cruz H; Trevino CL; Darszon A; Buffone MG. A specific transitory increase in intracellular calcium induced by progesterone. Biol Reprod (2016). (en prensa).
  3. Romarowski A; Luque GM; LA Spina FA; Krapf D; Buffone MG. Role of actin cytoskeleton during mammalian sperm acrosomal exocytosis. Adv Anat Embryol Cell Biol. 2016 (en prensa).
  4. Stival C; Puga Molina L; Buffone MG; Visconti PE; Krapf D. Sperm capacitation and acrosome reaction in mammalian sperm. Adv Anat Embryol Cell Biol. 2016 (en prensa).
  5. Romarowski A; Battistone MA; La Spina FA; Puga Molina L;  Luque GM; Vitale AM; Cuasnicu PS; Visconti PE; Krapf D; Buffone MG. PKA-dependent phosphorylation of LIMK1 and Cofilin is essential for mouse sperm acrosomal exocytosis. Dev Biol. 2015 Sep 15;405(2):237-49.
  6. Stival C; La Spina FA; Arranz SA; Visconti PE; Buffone MG; Krapf D. Src is the connecting player between PKA activation and hyperpolarization through SLO3 regulation in mouse sperm. J Biol Chem. 2015 Jul 24;290(30):18855-64.
  7. Hirohashi N, La Spina FA, Romarowski A, Buffone MG. Redistribution of the intra-acrosomal EGFP before acrosomal exocytosis in mouse spermatozoa. Reproduction. 2015 Jun;149(6):657-63.
  8. Buffone MG, Wertheimer EV, Visconti PE, Krapf D. Central role of soluble adenylyl cyclase and cAMP in sperm physiology. Biochim Biophys Acta. 2014 Dec;1842(12PB):2610-2620. Review.
  9. La Spina F, Romanato M, Brugo-Olmedo S, De Vincentiis S, Julianelli V, Rivera RM, Buffone MG. Heterogeneous distribution of histone methylation in mature human sperm. J Assist Reprod Genet. 2014 Jan;31(1):45-9.
  10. Caballero-Campo P, Buffone MG, Benencia F, Conejo-García JR, Rinaudo PF, Gerton GL. A Role for the Chemokine Receptor CCR6 in Mammalian Sperm Motility and Chemotaxis. J Cell Physiol. 2014 Jan;229(1):68-78.
  11. Brugo Olmedo S, De Vincentiis S, De Martino E, Bedecarrás P, Blanco AM, Freire A, Buffone MG. Rey R. Prediction of reproductive outcomes according to different serum anti-Müllerian hormone levels in females undergoing intracystoplasmic sperm injection. PLoS One. 2013 Sep 17;8(9):e75685.
  12. De Vincentis S, De Martino E, Buffone MG, Brugo-Olmedo S. The use of metaphase I oocytes matured in vitro is associated with embryo multinucleation. Fertil Steril. 2013 Feb;99(2):414-21.
  13. Buffone MG, Calamera JC, Brugo-Olmedo S, De Vincentis S, Calamera MM, Storey BT, Doncel GF, Alvarez JA. Superoxide dismutase content in sperm correlates with motility recovery after thawing of cryopreserved human spermatozoa. Fertil Steril. 2012 Feb;97(2):293-8.
  14. Buffone MG, Ijiri T, Cao W, Merdiushev T, Aghajanian HK, Gerton GL. Heads or tails? Structural events and molecular mechanisms that promote mammalian sperm acrosomal exocytosis and motility. Mol Reprod Dev. 2012 Jan;79(1):4-18.
  15. Muro Y, Buffone MG, Okabe M, Gerton GL. Function of the Acrosomal Matrix: Zona Pellucida 3 Receptor (ZP3R/sp56) Is Not Essential for Mouse Fertilization. Biol Reprod 2012 Jan 30;86(1):1-6.
  16. Hirohashi N, Gerton GL, Buffone MG. Video imaging of the sperm acrosome reaction during in vitro fertilization. Commun Integr Biol. 2011 Jul;4(4):471-6.
  17. Bedford-Guaus SJ, McPartlin LA, Xie J, Westmiller SL, Buffone MG, Roberson MS, Molecular Cloning and Characterization of Phospholipase C Zeta in Equine Sperm and Testis Reveals Species-Specific Differences in Expression of Catalytically Active Protein. Biol Reprod, 2011 Jul; 85(1): 78-88.
  18. Sosnik J, Buffone MG, Visconti PE. Analysis of CAPZA3 localization reveals temporally discrete events during the acrosome reaction. J Cell Physiol. 2010 Sep;224(3):575-80.
  19. Muray S, Stein P, Buffone MG, Yamashita S, Schultz RM. Recruitment of Orc6l, a dormant maternal mRNA in mouse oocytes, is essential for DNA replication in 1-cell embryos. Dev Biol. 2010 May 1; 341(1): 205-12.
  20. Buffone MG, Schindler K, Schultz RM. Over-expression of CDC14B causes mitotic arrest and inhibits zygotic genome activation in mouse preimplantation embryos. Cell Cycle. 2009 Dec 1; 8(23).
  21. Buffone MG, Kim KS, Doak, BJ. Rodriguez-Miranda E, Gerton GL. Functional consequences of Cleavage, dissociation, and exocytotic release of ZP3R/sp56 from the mouse sperm acrosomal matrix. J Cell Sci. 2009 Sep 1;122(Pt 17):3153-60.
  22. Pan J, Eckardt SN. Leu A, Buffone MG, Gerton GL, McLaughlin KJ, Wang PJ. Inactivation of nuclear export factor 2 (Nxf2) impairs spermatogenesis in mice. Dev Biology. 2009 Jun 1;330(1):167-74.
  23. Buffone MG., Rodriguez-Miranda E, Storey BT, Gerton GL. Acrosomal Exocytosis of Mouse Sperm Progresses in a Consistent Direction in Response to Zona Pellucida, J Cellular Physiology. 2009 Sep;220(3):611-20.
  24. Buffone MG, Verstraeten SV, Calamera JC, Doncel GF, High Cholesterol Content and Decreased Membrane Fluidity in Human Spermatozoa are Associated with Protein Tyrosine Phosphorylation and Functional Deficiencies. J Androl. 2009 Sep-Oct;30(5):552-8.
  25. Calamera JC, Buffone MG, Brugo-Olmedo S, De Vincentis S, Calamera MM, Storey BT, Doncel GF, Alvarez JA. Effect of thawing temperature on the motility recovery of cryopreserved human spermatozoa. Fertil Steril. 2010 Feb;93(3):789-94.
  26. Buffone MG, Doncel GF, Calamera JC, Verstraeten SV. Capacitation-associated changes in membrane fluidity in asthenozoospermic human spermatozoa. Int. J. Andrology 2009 Aug;32(4):360-75.
  27. Buffone MG, Foster JA, Gerton GL. Role of the acrosomal matrix in fertilization. Int J Dev Biol. 2008; 52(5-6):511-22.
  28. Rodriguez-Miranda E*, Buffone MG*, Edwards SE, Ord TS, Lin K, Sammel MD, Gerton GL, Moss SB, Williams CJ. Extracellular Adenosine 5'-Triphosphate Alters Motility and Improves the Fertilizing Capability of Mouse Sperm. Biol Reprod, 2008 Jul;79(1):164-71. *Coautores
  29. Buffone MG, Zhuang T, Ord TS, Hui L, Moss SB, Gerton GL. Recombinant mouse sperm ZP3-binding protein (ZP3R/sp56) forms a high order oligomer that binds eggs and inhibits mouse fertilization in vitro. J Biol Chem. 2008 May 2;283(18):12438-45.
  30. Edwards SE, Buffone MG, Knee GR, Rossato M, Bonanni G, Masiero S, Ferasin S, Gerton GL, Moss SB, Williams CJ. Effects of extracellular adenosine 5'-triphosphate on human sperm motility. Reprod Sci. 2007 Oct;14(7):655-66.
  31. Cheng Y, Buffone MG, Kouadio M, Goodheart M, Page DC, Gerton GL, Davidson I, Wang PJ. Abnormal sperm in mice lacking the Taf7l gene. Mol Cell Biol. 2007 Apr;27(7):2582-9.
  32. Buffone MG, Brugo-Olmedo S, Calamera JC, Verstraeten SV, Urrutia F, Grippo L, Corbetta JP, Doncel GF.Decreased protein tyrosine phosphorylation and membrane fluidity in spermatozoa from infertile men with varicocele. Mol Reprod Dev. 2006 Dec;73(12):1591-9.
  33. Buffone MG, Calamera JC, Verstraeten S.V, Doncel GF. Capacitation-associated protein tyrosine phosphorylation and membrane fluidity changes are impaired in the spermatozoa of asthenozoospermic patients. Reproduction. 2005 Jun;129(6):697-705.
  34. Marín-Briggiler CI, Chertihin O, Buffone M, Herr J, Vazquez-Levin MH, Visconti PE. Evidence of the presence of calcium/calmodulin-dependent protein kinase IV in human sperm and its involvement in motility regulation. J Cell Sci. 2005 May 1;118(Pt 9):2013-22.
  35. Buffone MG, Doncel GF, Marin Briggiler CI, Vazquez-Levin MH, Calamera JC. Human sperm subpopulations: relationship between functional quality and protein tyrosine phosphorylation. Hum Reprod. 2004 Jan;19(1):139-46.
  36. Calamera J, Buffone M, Ollero M, Alvarez J, Doncel GF. Superoxide dismutase content and fatty acid composition in subsets of human spermatozoa from normozoospermic, asthenozoospermic, and polyzoospermic semen samples. Mol Reprod Dev. 2003 Dec;66(4):422-30.
  37. Marín Briggiler CI, González Echeverría F, Buffone M, Blaquier J, Calamera JC, Tezón JG, Vázquez Levin MH. Calcium requirements for human sperm function in vitro”. Fertil Steril, Vol. 79 (6), 2003. 1396-403.
  38. Calamera JC, Fernández PJ, Buffone MG, Acosta AA, Doncel GF. Effects of long term in vitro incubation of human spermatozoa: functional parameters and catalase effect. Andrologia 33: 79-86, 2001.
En revistas nacionales

1.     Hormona anti-Mülleriana (AMH) como herramienta diagnóstica en la mujer. Rey R, Bedecarrás P, Brugo Olmedo S, De Vincentiis S, Calamera P, Blanco AM, Grinspon R, Freire A, Buffone MG. Revista SAEGRE; 2013 21(3),12-25.

2.     Serum AMH level can predict the risk of cycle cancellation and the chances of good ovarian response, independently of patient's age or FSH. Calamera, P, Buffone, MG, De Vincentiis, S, Rey RA, Olmedo SB. Jornal Brasileiro de Reproducao Assistida. 2013, 17(2),101-108.

3.     Eventos estructurales y mecanismos moleculares que promueven la exocitosis acrosomal y la motilidad en espermatozoides de mamífero. La Spina F, Romarowski A, Buffone MG. Revista de la Sociedad Argentina de Andrología. Vol: 20, Número 2, Diciembre de 2011.

4.     Mecanismos moleculares relacionados con la exocitosis acrosomal en espermatozoides de mamífero. Romarowski A, La Spina F, Buffone MG. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2011; 45 (4): 599-719.

5.     Impacto del estrés oxidativo en la capacidad fecundante de los espermatozoides humanos y su relación con los anticuerpos anti-espermatozoides. Calamera JC, Buffone MG, Doncel GF. Revista de la Sociedad Iberoamericana de Información Científica (SIIC). Octubre de 2004.

6.     Evaluación de la Integridad de la Cromatina en espermatozoides humanos. Buffone MG, Calamera JC. Revista de la Sociedad Argentina de Andrología. Vol: 13, Número 1, Julio de 2004.

7.     Tests de Azul de Anilina y Naranja de Acridina como herramientas para evaluar la cromatina espermática conjuntamente con la morfología estricta en pacientes de ICSI. Buffone MG, Brugo Olmedo S, De Vincentiis S, Calamera JC. Revista de Med. Reproductiva. vol 6, N°2, Diciembre de 2003.

8.     Videomicrografía Computarizada, en el estudio del semen humano, 1° parte. Calamera JC, Santillan CA, Buffone MG.  Revista de Med. Reproductiva. vol 5, N°2 Agosto de 2002.

9.     Videomicrografía Computarizada, en el estudio del semen humano, 2° parte. Calamera JC, Santillan CA, Buffone MG.  Revista de Med. Reproductiva. vol 5, N°3, Diciembre de 2002.

10.  Capacitación y Reacción Acrosómica. Buffone MG, Calamera JC. Informe ALAC, Ciencia y Técnica 2: 7-12, 2001.

En libros
  1. La Spina FA, Stival, C, Krapf D, Buffone MG. Molecular and cellular aspects of mammalian Sperm Acrosomal Exocytosis. En “Animal Models and Human Reproduction”. 2016. Wiley Ed. (en prensa).
  2. Buffone MG, De Vincentis S, Brugo-Olmedo S. “Mecanismos de fertilización en mamíferos” en “El ovocito como paciente”. Primera Edición. Editorial Ascune. 2014. Pág. 61-72.
Laboratorios
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